犬、猫：2.5-5 mg/m2 p. o.每周2次。根据不良反应调整用药频率。参见医学计算器中体重及体表面积换算表。

小型哺乳动物、鸟类、爬行动物：未知

一种S期特异性抗代谢、抗肿瘤药物；竞争性抑制嘌呤叶酸还原酶，导致嘌呤合成、DNA合成和细胞复制障碍，从而抑制DNA的合成和功能。

用于淋巴瘤的治疗，但因其毒性限制了在动物上的使用。在人，还用于治疗难治性类风湿性关节炎。然而由于缺乏研究数据，限制了其在犬猫的免疫介导性多发性关节炎中的应用。给药期间需定期检测血液指标。

细胞毒性药物，详细信息参见专业书籍。

骨髓抑制者禁用，严重肝或肾功能不全者禁用，对本品过敏者禁用。

尤其在髙剂量时，常见胃肠道溃疡、黏膜炎、肝毒性、肾毒性和血液系统毒性。

甲氨蝶呤能与血清白蛋白髙度结合，因此可能被保泰松、苯妥英钠、水杨酸盐类、磺胺类和四环素所置换，从而增加血药浓度和毒性。叶酸补充剂可能会抑制甲氨蝶呤的药效。甲氨蝶呤能增加阿糖胞苷的细胞毒性。氢化可的松、甲泼尼龙和青霉素能减少甲氨蝶呤的细胞摄入,而长春新碱能增加摄入。与非甾体类抗炎药同时使用，会增加血液系统毒性、肾毒性和肝毒性。