犬发情期血清孕酮水平与最佳配种时间的测定

摘要：
    本研究通过对中国农业大学教学动物医院临床发情母犬血清孕酮检测，统计发情期母犬血清孕酮水平，并探索藏獒和德国牧羊犬最佳配种时机，为优秀犬种的繁育工作提供实践指导。结果表明，藏獒血清孕酮值在20~30ng/ml时，受孕率可达到80%以上；德国牧羊犬血清孕酮值在10~20ng/ml范围内时，受孕率最高。藏獒发情后第10-15天，大部分犬血清孕酮值能达到20ng/ml以上，在此期间为最佳的配种时机。德国牧羊犬发情第9-14天，血清孕酮值基本在10ng/ml以上，此时为最佳的配种时机。

关键词：
    孕酮；母犬；发情；配种时机

    犬的发情是指犬达到性成熟后，在下丘脑-垂体-性腺轴控制分泌的激素作用下，表现出的一系列生理和行为的周期性变化。犬为季节性单次或双次发情动物，一般在每年春季和秋季发情。但由于犬的生殖生理有别于其他家畜，不同品种犬的排卵时间变化范围较大；另外，犬排卵后排出的是未成熟的卵子，需要在体内发育一段时间后才具备受精能力。犬生殖周期的这种特殊性使得犬种繁育工作具有非常大的挑战性。

1. 材料与方法

1.1 材料
    选择2014年10月至2015年5月到中国农业大学教学动物医院监测孕酮的发情母犬共222例；VIDASProgesterone孕酮检测试剂盒（酶联荧光法），购自梅里埃诊断产品（上海）有限公司；Eppendorf移液器；miniVIDAS。

1.2 发情状态
    所有受试犬均为动物主人观察到该犬出现阴门肿胀，并出现血性分泌物的时间作为发情期开始的标志。

1.3 血清孕酮的测定
    后肢隐静脉采集1.5ml血液，3500rpm，离心5min分离出血清备用。

2. 结果

2.1 年龄分布
    调查期间检测孕酮的犬年龄分布如表1所示，表中可见，有34.5%来医院进行血清孕酮检测的犬年龄在1岁以下，此时一般为初次发情，在这其中尤以德国牧羊犬居多，占该犬种的一半以上（52.9%）；大部分检测孕酮的犬是在1-5岁之间，占总数的55.9%；另外有小部分（9.5%）的犬年龄在5岁以上。

2.2 品种分布   
    调查结果表明，在调查期间，来院检测孕酮的犬大部分为大型犬，其中藏獒占70.5%；约23.2%为德国牧羊犬；其他犬种包括比特犬、杜宾犬、金毛寻回犬、格力犬、拉布拉多犬、贵宾/泰迪犬、京巴犬等中小型犬种。

2.3 血清孕酮水平
    本次试验统计期间，对动物医院临床共220只犬进行有效统计，结果发现，繁殖场藏獒普遍采用人工授精方法进行繁殖，当藏獒（N=155）孕酮值在10-30之间时，配种成功率大于70%，与其他范围组相比存在显著差异；其中，当藏獒血清孕酮值达到20-30范围内时，配种成功率大于80%。
    德国牧羊犬繁殖场则采用人工授精与自然交配相结合的繁育方式。统计结果表明，当德牧（N=51）孕酮值范围在10-20之间时，与其他组相比，该组总体配种成功率最高，各组之间存在显著差异。

2.4 最佳配种时机
    繁殖场养殖者通常将犬阴门出现血性分泌物的第一天视为发情期的开始，从统计的藏獒发情天数与孕酮值之间关系看，一般发情10-15天左右，藏獒血清孕酮值能达到上述适宜配种范围内。统计数据如图3所示，两条虚线之间数据点为藏獒最佳受孕血清孕酮值范围。

    图3 藏獒发情时间与血清孕酮水平
    注：血清孕酮单位为ng/ml；总样本量N=155，d表示发情天数
    统计数据表明，德国牧羊犬在出现血性分泌物的9-14天左右，血清孕酮水平能上升到10ng/ml以上，达到最适配种范围内。如图4所示，两条虚线之间为受孕率最高的孕酮值范围。

    图4 德国牧羊犬发情时间与血清孕酮水平
    注：血清孕酮单位为ng/ml；总样本量N=51，d表示发情天数

3. 讨论
    母犬发情，是犬达到性成熟后，在下丘脑-垂体-性腺轴控制下，由于激素分泌所引起的犬的一系列生理及行为的周期性变化。犬的发情期可人为分成发情前期，发情期，发情后期和乏情期四个阶段。一般情况下，根据犬种差异，发情前期约6~11天，发情期持续5~9天，发情后期约56~60天，乏情期可持续数月。在发情间期，母犬血清雌激素维持在一个较低的基础水平，随着卵泡发育成熟，体内雌激素水平逐渐上升至平台期，引起母犬一系列生理行为变化；发情前期最初的几天内，卵泡细胞开始分泌孕酮作为雌激素分泌的前驱激素；进入发情期的前1~2天，母犬血清雌激素浓度达到峰值。卵泡发育成熟后，雌激素浓度下降，进入发情期。随着卵泡黄体化，分泌大量孕酮，在接下来的5~20天，雌激素将逐渐下降到基础值[1]。发情前期犬血清中逐渐增加的孕酮浓度和不断下降的雌激素水平导致母犬的行为从拒绝交配变为出现主动求偶行为。另外，激素水平的变化对下丘脑和垂体有强烈的正反馈作用，使促卵泡生成素FSH和促黄体生成素LH开始分泌。
    孕酮是由黄体分泌的一种甾体激素，哺乳动物雌性的各种生殖活动，如排卵、维持妊娠、启动分娩、乳腺发育等各方面发挥着至关重要的作用[2]。在发情前期结束前的48-72h，犬血清孕酮浓度较低，基础值在0.5ng/ml以下[3]。在发情前期末和发情期初，伴随着雌激素浓度的下降，母犬血清中孕酮浓度会逐渐上升至1.0ng/ml以上。从另一方面来说，卵泡细胞合成和分泌孕酮的功能早于黄体的发育。这些细胞分泌的孕酮是发情前期末血清孕酮浓度增加以及母犬出现特殊的生理和行为变化的原因。随着卵泡排卵和黄体化程度不断增加，血清孕酮浓度逐渐上升[4]。Concannon等研究认为，黄体形成后，LH分泌峰值出现在排卵前24~48小时[5]，在排卵后达到峰值并进入平台期。周天胜[6]对犬生殖器官发育及血清激素水平进行监测，发现比格犬发育到12月龄时，血清孕酮浓度达到峰值。发情周期中，血清孕酮水平在第9天前总体呈现上升趋势，并在第9天达到峰值，之后浓度逐渐下降，与本研究统计结果一致。
    贺星亮[7]等采用“阴道涂片法”观察母犬在发情期不同阶段的细胞形态变化，并比较阴道上皮角化细胞率分别为70%～80%、80%～90%和90%～100%时发情母犬的接受交配情况、受孕率和产仔数。结果发现，在阴道上皮细胞角化程度较低时，母犬配种成功率、受孕率和产仔数均降低，当角化细胞率达到90%～100%时为最佳配种时机。而阴道上皮的细胞学变化是由母犬体内激素水平变化相关的。徐永志等摸索自然发情母犬阴道角质化上皮细胞的变化规律，发现大部分自然发情的母犬在阴道出现血性分泌物后第9～13天，角质化上皮细胞比例超过80%，阴道粘膜出现明显浮冰样堆积。本研究通过统计发现，藏獒和德国牧羊犬在发情第9~15天后，大部分犬血清孕酮浓度上升至适宜配种范围内，部分犬阴道涂片中角化细胞均达到80%以上，与马文芝等[8]研究结果一致。Hori等[9]研究发现，比格犬在阴道出现血性分泌物以后11天左右排卵。统计结果表明，藏獒发情10~15天，血清孕酮值在20~30ng/ml；德国牧羊犬发情9~14天，血清孕酮值在10~20ng/ml时，母犬受孕率最高，达到70%以上，与Hori等研究结果一致。需引起注意的是，孕酮值并不是越高越好，犬发情期间，如果体内过高浓度的血清孕酮水平可能会导致子宫颈口闭锁，合并细菌感染会导致子宫蓄脓的发生[10, 11]。
    母犬发情的鉴定方法有很多种，包括阴道涂片法、激素测定法、阴道内窥镜观察法、唾液结晶法[12]等，每一种方法均有其优缺点。由于犬发情周期与其他动物相比具有其特殊性，卵泡发育及排卵机制尚未清楚，要准确把握犬的配种时期，应结合多种方法综合判断。另外，犬的发情受到品种、年龄、地理环境、营养条件、光照时间等多种因素[13]影响，由于本研究中所有的犬均来自动物医院临床，营养状况、饲养环境等并不一致，因此孕酮值范围差别较大，但同一品种的变化趋势在大体上是一致的，建议后续研究中对影响因素进行控制，对犬种繁育提供更多的理论支持和实践指导。

参考文献
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[5]Concannon P W, Weinstein P, Whaley S, et al.Suppression of luteal function in
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[7]贺星亮, 张汇东, 马大君, 等. 发情母犬阴道上皮细胞变化与最佳配种时间. 畜牧与兽医, 2004,36(10):37~38
[8]马文芝, 王玮, 王会颖, 等. 母犬阴道细胞学检查方法的建立与研究. 天津农学院学报, 2005,12(2):1~5
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crystallisation as a means of determiningoptimal mating time in bitches. J Small
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[13]范泉水, 齐桂凤, 陆明昌. 犬的发情周期及最佳受孕时间. 云南畜牧兽医, 1994,04期:16~17