北京地区25例犬吉氏巴贝斯虫病例分析

摘要：
    为调查北京地区犬吉氏巴贝斯虫病的感染与治疗情况，2014年10月至2016年1月期间，本研究对中国农业大学动物医院就诊的25例犬吉氏巴贝斯虫感染病例进行调查统计，记录其临床症状，分析全血细胞计数（Complete Blood Count，CBC）、生化检查结果和三氮脒的治疗效果。结果显示25例患犬均出现不同程度的贫血，73.3%（11/15）的患犬出现了免疫介导性溶血性贫血（Immune-mediated hemolytic anemia,IMHA），使用三氮脒和输血疗法治疗后，71.2%（10/14）的患犬取得良好的疗效，但目前跟踪的病例中，21.4%（3/14）的患犬已复发。

关键词：
    犬；吉氏巴贝斯虫；CBC；PCR检查

1.  研究对象与研究方法
    2014年10月至2015年1月期间，从中国农业大学动物医院就诊病例中选取25例有蜱接触史的患犬，记录其年龄、品种、性别、临床症状、实验室检查（包括CBC和生化检查）结果，并对患犬进行PCR诊断；对使用DIMINAPHEN
granules治疗的患犬，跟踪其治疗效果，监测分析其各项实验室检查指标的变化。
    PCR检查方法如下：（1）DNA提取：参照QIAamp DNA mini kit 试剂盒说明书提取DNA。（2）PCR扩增：参照Muhlnickel C J等人设计的引物和反应体系[1]，扩增巴贝斯虫的18S rRNA基因。（3）电泳：PCR反应结束后，取5 μL产物置于1.0 %琼脂糖凝胶上电泳。（4）PCR测序：将PCR产物送至奥美德诺公司测序，然后将测序结果与NCBI中的18SrRNA序列进行比对，同源性97%者判为吉氏巴贝斯虫（B.gibsoni）。

2.  结果

2.1  年龄、品种和性别分布
    本次调查显示，发病犬的年龄从7月到16岁不等，平均发病年龄为3.87±3.68岁；患犬多为公犬（16只，64%），母犬8只（32%），绝育犬1只（4%）；杂种犬（4只，16%）、德国牧羊犬（4只，16%）、金毛寻回犬（3只，12%），其他品种如拉布拉多寻回犬、雪纳瑞犬和贵宾犬、西施犬等也有发病。

2.2  临床症状
    24例患犬主要表现黏膜苍白、精神沉郁、食欲减退、发热、消瘦、呕吐等症状（见表1），仅1例（4%）患犬就诊时表现为明显黄疸。

2.3  实验室检查结果

2.3.1 CBC检查结果

    患犬于初诊时表现为红细胞总数（3.24±2.18×1012/L）下降、红细胞比容（21.26±12.36%）下降、血红蛋白（6.42±3.88g/dL）下降、平均红细胞体积（72.39±12.76）轻度升高，伴网织红细胞（214.92±193.17）轻度升高；另外，白细胞总数（19.24±14.11×109/L）升高，血小板（82.71±101.7K/μL）下降（详见表2）。

2.3.2 血清生化检查结果
    患犬于初诊时总胆红素（21.09±29.87μmol/L）和直接胆红素（12.2±21.59μmol/L）轻微升高；天门冬酰胺氨基转移酶（80.57±34.59U/L）和碱性磷酸酶（396.6±253.48U/L）升高；肌酐（201.56±470.17μmol/L）和尿素（27.02±34.16mmol/L）升高、肌酸激酶（597.5±948.04U/L）和乳酸脱氢酶升高（485.43±465.35U/L）。（详见表3）。

2.3.3 PCR检查结果
    25只患犬中，23只（92%）血涂片镜检B.gibsoni阳性，PCR检查均为阳性（100%）。
图1：18srRNA扩增结果（阴性条带排除B.gibsoni）

2.4 治疗及监测
    25例患犬中，其中仅有14例接受了DIMINAPHEN granules的治疗，4例患犬因严重贫血同时进行输血治疗，有4例患犬的主人直接放弃治疗，5例失联；电话回访结果显示接受治疗的14例患犬中，10例（71.4%）于首期治疗后病情得到控制，但目前有3例（21.4%）复发；4例（28.6%）因贫血及其他严重的并发症死亡。

3. 讨论
    巴贝斯虫病，又称焦虫病，通过蜱媒传播，是寄生于脊椎动物红细胞中的一种血液寄生虫病[1,
2]。该病在蜱流行区发病率较高，因此，东南亚、北美、南美等地广泛流行[1-4]。我国已报道的犬巴贝斯虫病多为B.gibsoni感染，在我国江苏、河南的部分地区呈地方性流行，对宠物犬构成严重危害[5-7]。本次调查在中国农业大学动物医院（大型转诊医院，全年接诊量约60000例）完成，历时14个月，期间仅有25例犬被诊断为B.gibsoni感染，整体发病率并不高。这一结果提示北京并非犬B.gibsoni高发区，和流行病学特征相符。虽然北京并非蜱流行区，但根据Jefferies等人于2007年的报道，咬伤也可能会导致虫体经过直接的血液接触传播，这一途径不需要传播媒介，鉴于此，还应加强B.gibsoni流行病学的监控[4]。
    本次调查中，患犬多为成年犬，平均年龄为3.87±3.68岁，公犬占64%（16只）；杂种犬（4只，16%）、德国牧羊犬（4只，16%）和金毛寻回犬（3只，12%）较多。这一结果提示患犬多为青年雄性犬，但由于数据量小，无法全面分析流行病学特征。
    B.gibsoni感染的潜伏期从数天到数周不等，患犬主要表现精神沉郁、体重下降、黄疸、淤血等症状[8]，实验室检查多表现再生性贫血、肝酶升高等，严重血管内溶血的病例还会出现黄疸。本次调查中，所有患犬均表现出不同程度的精神沉郁，96%的患犬有食欲不振和黏膜苍白的症状，仅有一例有明显黄疸；实验室检查结果证实所有黏膜苍白的病例均出现了严重贫血（3.24±2.18×1012/L），贫血程度和病程有一定关系，精神沉郁超过一周的患犬贫血极其严重，这可能跟病原体在红细胞内进行胞内复制，引发血管内和血管外溶血性贫血有关。机体对抗虫体的免疫介导反应和自身抗原的改变能加重溶血性贫血，巨噬细胞受刺激后能引起发热和肝脾肿大[8]。本次调查中，73.3%（11/15）的病例出现了IMHA，不但诱发了严重贫血，也会诱发骨髓代偿作用，使外周血白细胞升高（伴有核左移）；另外，本次调查中，患犬的血小板也明显下降，由于这些患犬无明显出血现象，排除了血小板消耗的因素，最有可能的原因是免疫介导性的。
    该病主要依靠实验室诊断，外周血血涂片见到病原体结合临床症状即可确诊，但随着PCR技术和血清学检查的应用，诊断率大大提高。本次调查中，25例患犬中23例血涂片检查为阳性，但所有PCR检查均为阳性，这一结果提示血涂片检查有一定的漏诊率，在临床工作中，若高度怀疑该病，可通过PCR检查辅助诊断。
    目前尚无犬B.gibsoni感染的标准治疗方案，主要治疗原则为杀虫和辅助治疗（如输血治疗）[9]。亚洲一些国家地区普遍使用三氮脒（一线药物，3mg/kg，IM，SID，连用三天）和阿托喹酮（atovaquone，13.3mg/kg，PO，TID）[3]，国内主要使用DIMINAPHENgranules（主要成分为三氮脒和安替比林，10
mg/kg，SC/IM，隔天一次，连用三次）。阿托喹酮和阿奇霉素（10mg/kg，PO，SID）联合应用治疗效果良好[10]。报道显示三氮脒治疗的患犬复发率较高，近年来一些病例使用阿托喹酮治疗后也会复发，基因检测证实病原体已出现CYTb基因（抗阿托喹酮的基因）突变[10]。本次调查中，14例患犬接受了DIMINAPHENgranules的治疗，10例（71.4%）患犬于首期治疗后症状得到缓解，1例于治疗当天死亡；1例于治疗半个月时死亡，另外2例治疗20天后仍未见好转。这些预后不良的病例于初次诊断时已出现严重的IMHA，提示本病需及时诊断，在治疗时还应注意加强对IMHA的控制。目前跟踪回访显示，3例患犬已复发，复发时患犬均表现严重贫血。由于本次调查未涉及耐药性研究，尚不清楚复发病例的病原对三氮脒的耐药性，需要进一步研究。

4. 结论
    本次调查中，北京地区犬B.gibsoni发病率并不高；主要通过血涂片检查诊断，但PCR检查能提高检出率；北京地区主要的特异性治疗药物为DIMINAPHEN granules，治疗效果和并发的IMHA有很大关系；有些病例出现复发，需进一步进行耐药性研究，以指导临床工作。

参考文献
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JefferiesR, Ryan U M, Jardine J, et al. Blood, Bull Terriers and Babesiosis:
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2007,85(11):459-463.
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一例犬吉氏巴贝斯虫病的诊治. 黑龙江畜牧兽医, 2010(10):106.[8]  NelsonR W, Couto C G. Small animal
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